安捷倫高效液相色譜儀的規范操作
1. 目的：明確安捷倫高效液相色譜儀的規范操作，確保數據的準確性。
2. 范圍：適用于安捷倫高效液相色譜儀。
3. 職責：檢驗人員對此負責。
4. 操作規程：
4.1 系統組成
本系統由1個溶劑二元輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、手動進樣閥、柱溫箱、檢測器、化學工作站和電腦等組成。
4.2 準備
4.2.1使用前應根據待檢樣品的檢驗方法準備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。
4.2.2 根據待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（柱進出口位置應與流動相流向一致）和定量環。
4.2.3 配制樣品和標準溶液（也可在平衡系統時配制），用合適的0.45μm濾膜過濾。
4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常
4.1 將待測樣品按要求前處理，準備HPLC 所需流動相，檢查線路是否連接完好，廢液瓶是否夠用等。
4.3開機：
4.3.1 打開計算機,進入中文Windows XP畫面,并運行CAG Bootp Server程序。
4.3.2 打開 1200 LC 各模塊電源。
4.3.3 待各模塊自檢完成后，雙擊[Instrument 1 Online]圖標，化學工作站自動與1200LC通訊，進入的工作站畫面如下所示。
4.3.4 從[視圖]菜單中選擇[方法和運行控制]畫面, 點擊[視圖]菜單中的[顯示頂部工具欄]， [ 顯示狀態工具欄]，[系統視圖],[樣品視圖]，使其命令前有[√]標志，來調用所需的界面。
4.3.5 把流動相放入溶劑瓶中。
4.3.6 打開沖洗閥。
4.3.7 點擊[泵]圖標，點擊[設置泵…]選項，進入泵編輯畫面。
4.3.8 設流速：5ml/min，點擊[確定]。
4.3.9 點擊[泵] 圖標，點擊[控制…]選項，選中[啟動]，點擊[確定] ，則系統開始沖洗，直到管線內（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續沖洗，直到所有要用通道無氣泡為止。
4.3.10 點擊[泵] 圖標，點擊[控制…]選項，選中[關閉]，點擊[確定]關泵， 關閉沖洗閥。
4.3.11 點擊[泵]圖標，點擊 [設置泵…選項]，設流速：1.0ml/min。
4.3.12 點擊泵下面的瓶圖標，如下圖所示（以單元泵為例），輸入溶劑的實際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積，點擊[確定]。
4.4 數據采集方法編輯
4.4.1開始編輯完整方法：從[方法]菜單中選擇[編輯完整方法…] 項，如下圖所示選中除[數據分析 ]外的三項，點擊[確定]，進入下一畫面。
4.4.2方法信息
4.4.2.1在[方法注釋]中加入方法的信息（如：測試方法）。
4.4.2.2 點擊 [確定]， 進入下一畫面。
4.4.3 泵參數設定
4.4.3.1 在[流速]處輸入流量,如1ml/min，在[溶劑 B]處輸入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[時間表] ,編輯梯度。在[壓力限]處輸入柱子的最大耐高壓，以保護柱子。
4.4.3.2 點擊[確定]，進入下一畫面。
4.4.4 柱溫箱參數設定
4.4.4.1 在[溫度]下面的空白方框內輸入所需溫度,如：40度。并選中它,點擊[更多>>] 鍵,如圖所示,選中[與左側相同]，使柱溫箱的溫度左右一致。
4.4.4.2 點擊[確定]，進入下一畫面。
4.4.5 檢測器參數設定：檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬：一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度
參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區域 。
參比帶寬：至少要與樣品信號的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。同時可以輸入采集光譜方式，步長，范圍，閾值。選中所用的燈。
4.4.6 在[ 運行時選項表 ]中選中[ 數據采集]，點擊[確定]。
4.4.7 點擊[方法]菜單，選中[方法另存為…]，輸入一方法名，如[測試]，點擊[確定]。
4.4.8 從菜單 [視圖]中選中[在線信號],選中[信號窗口1],然后點擊[改變…] 鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中,點擊[確定]。(如同時檢測二個信號,則重復10,選中[信號窗口2]。單擊[改變]鍵，即可彈出右側的[編輯信號圖譜]窗口，進而選擇所需的譜圖信號。
4.4.9 從[運行控制]菜單中選擇[樣品信息]選項，如下圖所示，輸入操作者名稱，如[安裝工程師]；在[數據文件 ]中選擇[手動]或[前綴/計數器]。區別: 手動--每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會將上次的數據覆蓋掉。 Pr—在前綴/計數器----[前綴]框中輸入前綴，在[計數器]框中輸入計數器的起始位，儀器會自動命名，如vwd數據0001，vwd數據0002……。
4.4.10 點擊[確定] ,從[儀器] 菜單選擇[系統開啟]。
4.4.11 等儀器準備好，基線平穩，用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
4.5 數據分析方法編輯:
4.5.1 從[視圖]菜單中，點擊[數據分析]進入數據分析畫面。
4.5.2 從[文件]菜單選擇[調用信號]，選中您的數據文件名，如下圖所示。點擊[ 確定]，則數據被調出。
4.5.3做譜圖優化：從[圖形]菜單中選擇[信號選項]，如下圖所示。從[范圍] 中選擇[滿量程] 或[自動量程] 及合適的時間范圍或選擇[自定義量程] 調整。反復進行，直到圖的比例合適為止。點擊[ 確定]。
4.6積分:
4.6.1 從[積分]菜單中選擇[積分事件]選項，如下圖所示。選擇合適的[斜率靈敏度]，[峰寬]，[最小峰面積]，[最小峰高]。
4.6.2 從[積分]菜單中選擇[積分]選項， 則數據被積分。
4.6.3如積分結果不理想，則修改相應的積分參數，直到滿意為止。
4.6.4點擊左邊[√]圖標，將積分參數存入方法。
4.7打印報告:
4.7.1從[報告]菜單中選擇[設定報告]選項，進入如下圖所示畫面。
4.7.2 點擊[定量結果]框中[計算]右側的黑三角，選中[面積百分比]，其它選項不變。
4.7.3 點擊[ 確定]。
4.7.4 從[報告]菜單中選擇[打印報告]，則報告結果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點擊[報告] 底部的[打印]鈕。
4.8關機:關機前，先關燈，用相應的溶劑充分沖洗系統。退出化學工作站，依提示關泵，及其它窗口，關閉計算機。關閉Agilent 1200各模塊電源開關。
4.9. 液相色譜日常維護
4.9.1. 貯液器
清潔是保持流動相貯液器正常使用的關鍵，要盡可能使用HPLC級的溶劑和試劑含有緩沖鹽和非HPLC級的流動相一定要通過0.45μm的過濾器以除去其中的微粒物質。改變流動相時應防止交叉污染，陳舊的流動相和用久了的試劑瓶應定期廢棄，防止生長微生物和組分改變。貯器內壁定期清洗，里面的附件要經常更換。
4.9.2. 泵
泵的密封圈是最易磨損的部件，密封墊圈的損壞可引起系統的許多故障。采取下列措施可以延長墊圈的壽命：
A 每天要把泵中的緩沖液體洗干凈，防止鹽沉積，泵要浸在無緩沖液的溶液或有機溶劑中；
B 用HPLC級試劑；
C 用燒結不銹鋼沉子。要注意防止因泵阻塞造成壓力過高而損壞柱塞桿或燒壞電機。
4.9.3. 進樣器
停機后要用溶劑沖洗干凈進樣器內殘留的樣品和緩沖鹽，防止無機鹽沉積和樣品微粒造成閥轉子面磨損或阻塞，嚴禁用氣相色譜那樣的尖針頭進樣。
4.9.4. 色譜柱
防止柱性能下降有以下幾方面的措施：
A 溶劑的化學腐蝕不能太強；
B 避免微粒在柱頭沉降；
C 泵上要裝壓力限制器，防止壓力過高沖擊大；
D 流動相pH>7時用大粒度同種填料作預柱；
E 柱頭加燒結片不銹鋼濾片，需要時加保護柱；
4.9.5. 檢測器
要保持檢測器清潔，每天用后連同色譜柱柱一起沖洗。提倡不定期用強溶劑
反向沖洗檢測池（拆開柱）。用脫過氣的流動相，防止空氣泡卡在池內。檢測器燈有一定的壽命，不用時不要打開燈。
5.0. 當儀器出現故障時應及時與廠家聯系，使用人員不得擅自拆開維修。
5.1. 使用人員應經過培訓的且熟練操作儀器，每次使用應進行使用登記。
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